急性髓系白血病(AML)作为恶性程度最高的血液肿瘤之一,其对传统化疗及免疫治疗的耐药性问题长期困扰临床。近年研究发现,肿瘤细胞通过劫持免疫检查点分子实现"免疫逃逸",但针对AML的特异性免疫抑制机制仍存在巨大认知盲区。本研究首次揭示,LILRB4/APOE信号轴通过重构肿瘤微环境,形成"免疫沉默-代谢重编程"双重防御体系,为AML精准治疗开辟全新路径。
本研究首次揭示LILRB4通过"配体-受体-信号-效应"四层架构调控AML免疫逃逸与转移,提出"免疫抑制-代谢重编程"双轨机制假说。靶向LILRB4的抗体疗法在临床前模型中展现出高效低毒特性,为单核细胞AML精准治疗提供新策略。相关成果已申请国际专利(PCT/US2016/020838),并与Immune-Onc Therapeutics公司达成转化合作。
研究方法
1. 临床样本分析
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利用TCGA数据库分析LILRB4 mRNA表达水平与AML患者预后的相关性,发现其高表达与生存期缩短显著相关。
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流式细胞术验证LILRB4在单核细胞AML(FAB M4/M5亚型)中特异性高表达于肿瘤细胞表面,且高于正常单核细胞。
2. 功能验证
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体外实验:通过CRISPR/Cas9构建LILRB4敲除细胞系(lilrb4-KO),结合野生型(WT)及回补细胞(lilrb4-KO-wt),利用Transwell共培养体系评估T细胞增殖抑制能力。
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体内模型:建立人源化免疫缺陷小鼠(NSG)及同源小鼠(C57BL/6)异种移植模型,通过皮下注射或静脉移植LILRB4敲除/过表达的AML细胞,监测肿瘤生长及T细胞浸润情况。

3. 机制解析
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配体鉴定:通过蛋白液相色谱(FPLC)、质谱(MS)及表面等离子共振(SPR)技术筛选并验证APOE为LILRB4特异性配体,结合常数(KD)为210 nM。
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信号通路分析:采用Western blot、免疫沉淀(Co-IP)及RNA测序(RNA-seq)探究下游信号通路,发现LILRB4通过SHP-2磷酸化激活NF-κB通路,诱导uPAR及ARG1表达。
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功能挽救实验:通过外源性补充APOE、uPAR或ARG1,验证其对T细胞抑制及肿瘤浸润的调控作用。

研究结果
1. LILRB4表达与AML预后及免疫抑制密切相关
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TCGA数据显示,LILRB4高表达组患者总生存期显著缩短(HR=2.34, p=0.0003),且其表达水平与T细胞耗竭标志物(PD-1、TIM-3)呈正相关。
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体外共培养证实,LILRB4+ AML细胞通过胞内段传递抑制信号,显著降低CD8+ T细胞增殖及IFN-γ分泌能力。

2. LILRB4通过APOE介导的信号轴调控T细胞抑制与肿瘤浸润
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配体结合:APOE通过其N端结构域与LILRB4的Ig样结构域结合,激活下游SHP-2磷酸化(p-Y580),进而促进NF-κB入核,上调uPAR及ARG1表达。
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功能依赖性:LILRB4敲除显著抑制THP-1细胞的跨内皮迁移能力(p<0.01),而APOE或uPAR回补可部分恢复其侵袭表型。

3. 靶向LILRB4的治疗潜力
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体内验证:抗LILRB4抗体(Fc工程化改造以降低ADCC效应)显著抑制AML异种移植瘤生长(肿瘤体积减少67%,p<0.001),并延长荷瘤小鼠生存期(中位生存期从28天延长至45天)。
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免疫重塑:抗体治疗促进肿瘤微环境中CD8+ T细胞浸润(浸润指数↑3.2倍),并增强其杀伤活性(颗粒酶B+ T细胞比例↑40%)。
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安全性评估:正常造血干细胞(CD34+)表面LILRB4表达极低(MFI=12±3 vs. AML细胞MFI=120±15),抗体处理未影响人源化小鼠骨髓重建效率。
ATHENS为本研究所提供的产品
Athens Research & Biotechnology为本研究提供了多种APO家族蛋白(尤其是重组人APOE),直接支持了LILRB4配体筛选、信号通路解析及功能验证,是揭示“APOE/LILRB4轴”在白血病免疫逃逸中作用的关键合作伙伴。
具体产品:
APOA1
APOA2
APOA4
APOB
APOC1
APOC2
APOC3
hAPOE
功能用途:
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作为候选配体,通过 蛋白液相色谱(FPLC) 和 表面等离子共振(SPR) 筛选,验证其与 LILRB4 的结合能力。
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用于 体外实验 中模拟生理条件下APOE对LILRB4的激活作用,证明其通过特定结构域(如Ig样结构域)与LILRB4相互作用。
文献链接见原文:http://www.nbs-bio.com/article/2691.html
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Athens Research & Technology公司(ART),自1986年成立以来,已近40年专注于生产优质天然蛋白质,致力于为体外诊断(IVD)行业及研究人员提供高纯度、高活性的产品。我们的制造流程严格,质量承诺值得信赖,确保客户能够依赖我们的蛋白质开发可靠、准确的诊断试剂,满足当今医疗保健的迫切需求。

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